ELISA試劑盒用作雙抗體夾心法檢測

<p>&nbsp;因此在運(yùn)用一步法<strong>ELISA試劑盒</strong>測定標(biāo)本中含量可反常增高的物質(zhì)（例如血清中HBsAg、AFP和尿液hCG等）時(shí)，應(yīng)留意可測規(guī)模的最高值。用高親和力的單克隆抗體制備此類試劑可削弱鉤狀效應(yīng)。<br /> 倘若在被測分子的不同位點(diǎn)上富含多個(gè)一樣的決定簇，例如HBsAg的a決定簇，也可用針對此決定的同一單抗分別包被固相和制備酶聯(lián)系物。但在HBsAg的檢查中應(yīng)留意亞型疑問，HBsAg有adr、adw、ayr、ayw4個(gè)亞型，盡管每種亞型均有一樣的a決定簇的反響性，這也是用單抗作夾心法應(yīng)留意的疑問。<br /> <strong>ELISA試劑盒</strong>雙抗體夾心法測抗原的另一留意點(diǎn)是類風(fēng)濕因子（RF）的攪擾。RF是一種本身抗體，多為IgM型，能和多種動(dòng)物IgG的Fc段聯(lián)系。血清標(biāo)本中如富含RF，它可充任抗原成份，一起與固相抗體和酶標(biāo)抗體聯(lián)系，表現(xiàn)出假陽性反響。選用F（ab'）或Fab片段作酶聯(lián)系物的試劑，因?yàn)槿サ袅薋c段，然后消除RF的攪擾。雙抗體夾心法ELISA試劑是否受RF的影響，已被列為這類試劑的一項(xiàng)查核目標(biāo)（拜見6.2）。<br /> 雙抗體夾心法適用于測定二價(jià)或二價(jià)以上的大分子抗原，但不適用于測定半抗原及小分子單價(jià)抗原，因其不能構(gòu)成兩位點(diǎn)夾心。直接法是檢查抗體常用的辦法。其原理為利用酶符號的抗抗體（抗人免疫球蛋白抗體）以檢查與固相抗原聯(lián)系的受檢抗體，故稱為直接法（見圖2-3）。操作進(jìn)程如下：<br /> 1）將特異性抗原與固相載體聯(lián)合，構(gòu)成固相抗原。洗刷除掉未聯(lián)系的抗原及雜質(zhì)。<br /> 2）加稀釋的受檢血清，保溫反響。血清中的特異抗體與固相抗原聯(lián)系，構(gòu)成固相抗原抗體復(fù)合物。經(jīng)洗刷后，固相載體上只留下特異性抗體，血清中的其他成份在洗刷進(jìn)程中被洗去。<br /> 3）加酶標(biāo)抗抗體。可用酶標(biāo)抗人Ig以<strong>ELISA試劑盒</strong>檢查總抗體，但通常多用酶標(biāo)抗人IgG檢查IgG抗體。固相免疫復(fù)合物中的抗體與酶標(biāo)抗體抗體聯(lián)系，然后直接地符號上酶。洗刷后，固相載體上的酶量與標(biāo)本中受檢抗體的量正相關(guān)。<br /> 4）加底物顯色<br /> 直接法成功的關(guān)鍵在于抗原的純度。盡管有時(shí)用粗提抗原包被也能獲得實(shí)踐有用的結(jié)果，但應(yīng)盡可能予以純化，以進(jìn)步實(shí)驗(yàn)的特異性。格外應(yīng)留意除掉能與通常健康人血清發(fā)作反響的雜質(zhì)，例如以E.Coli為工程酶的重組抗原，如其間富含E.Coli成份，很可能與受過E.Coli感染者血甭中的抗E.Coli抗體發(fā)作反響。ELISA試劑盒抗原中也不能富含與酶標(biāo)抗人Ig反響的物質(zhì)，例如來自人血漿或人體安排的抗原，如不將其間的Ig去掉，實(shí)驗(yàn)中也發(fā)作假陽性反響。別的如抗原中富含無關(guān)蛋白，也會(huì)因竟?fàn)幬蕉绊懓蛔饔谩?lt;/p>