上海酶聯(lián)生物ELISA實驗中不同類型樣本的處理方法

<div>&nbsp;</div> <div>通常我們用ELISA來檢測的樣本是有多種類型的，如血清、血漿、尿液、細胞培養(yǎng)上清或組織勻漿液等，不同類型的檢測樣本前期的處理方法是不一樣的。正確的處理樣本是保證ELISA檢測的正確性和準確性的第一步。&nbsp;</div> <div>&nbsp;</div> <div>1、 血清&nbsp;</div> <div>&nbsp;</div> <div>血清是常用于ELISA檢測的一類樣本，處理也比較簡單。用無熱原、無內(nèi)毒素的試管或離心管采集血液標本，將試管或離心管室溫放置2小時或4℃一個晚上，使血清析出。（最好將試管或離心管傾斜放置，使液面橫截面增大，能使血清更大程度的析出）。4℃1000&times;g離心20分鐘，仔細收集上清。建議將血清分裝多份，-20℃或-80℃保存，避免反復(fù)凍融。&nbsp;</div> <div>&nbsp;</div> <div>采血過程中應(yīng)避免溶血，因為紅細胞裂解時會釋放具有過氧化酶活性的物質(zhì)，在以HRP為標記的ELISA檢測中會有非特異性的顯色，而導(dǎo)致檢測的不準確性。同時也應(yīng)避免細菌污染，因為菌體內(nèi)可能含有內(nèi)源性的HRP從而導(dǎo)致檢測的假陽性。&nbsp;</div> <div>&nbsp;</div> <div>2、 血漿&nbsp;</div> <div>&nbsp;</div> <div>ELISA實驗用含抗凝劑的采血管或離心管采集血液標本，標本采集后30min內(nèi)4℃1000&times;g離心15min，取上清即血漿。將上清分裝多份，-20℃或-80℃保存，避免反復(fù)凍融。避免使用溶血或高血脂的標本。常用的抗凝劑為EDTA、肝素鈉和枸櫞酸鈉等，檢測時還應(yīng)仔細閱讀試劑盒說明書，檢查試劑盒是否對抗凝劑有特殊要求。&nbsp;</div> <div>&nbsp;</div> <div>3、 細胞培養(yǎng)上清&nbsp;</div> <div>&nbsp;</div> <div>取細胞培養(yǎng)上清到離心管，1000&times;g離心20min，除去細胞碎片及雜質(zhì)，取上清，-20℃或-80℃保存，避免反復(fù)凍融。&nbsp;</div> <div>&nbsp;</div> <div>4、 細胞裂解液&nbsp;</div> <div>&nbsp;</div> <div>（1）吸去培養(yǎng)板內(nèi)的培養(yǎng)基，用胰酶消化細胞，加適量培養(yǎng)基將細胞從培養(yǎng)板上吹下來。懸浮細胞可省略。&nbsp;</div> <div>&nbsp;</div> <div>（2）收集細胞懸液，1000&times;g離心10min，棄去培養(yǎng)基，用預(yù)冷的PBS潤洗3次。&nbsp;</div> <div>&nbsp;</div> <div>（3）加入適量的預(yù)冷PBS或細胞裂解液（臨用前加入蛋白酶抑制劑）重懸細胞。通常6孔板一個孔的細胞量需要150~250&mu;L PBS重懸。&nbsp;</div> <div>&nbsp;</div> <div>（4）將樣品放入-20℃或-80℃，使樣品冷凍，再放室溫解凍樣品，反復(fù)凍融幾次，使細胞充分裂解。也可將樣品進行超聲破碎，以達到裂解的目的。&nbsp;</div> <div>&nbsp;</div> <div>（5）4℃10000&times;g 離心10min，除去細胞碎片，取上清，-20℃或-80℃保存，避免反復(fù)凍融。&nbsp;</div> <div>&nbsp;</div> <div>5、組織勻漿液&nbsp;</div> <div>&nbsp;</div> <div>（1）將組織樣本用PBS (0.01 [錨點] [錨點] M, PH 7.4) 沖洗，洗去組織表面殘留的血液或雜質(zhì)。&nbsp;</div> <div>&nbsp;</div> <div>（2）將組織塊稱重，記錄后剪碎，碎塊應(yīng)盡量小，便于勻漿得更充分。&nbsp;</div> <div>&nbsp;</div> <div>（3）將組織按一定的比例加入預(yù)冷的PBS（臨用前加入蛋白酶抑制劑）勻漿，勻漿時置于冰上或冰浴中。（通常按組織重量：PBS體積=1:9的比例勻漿，例如1g的組織樣本對應(yīng)9mL的PBS，具體體積可根據(jù)實驗需要適當調(diào)整，檢測后計算樣品濃度時應(yīng)乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)）&nbsp;</div> <div>&nbsp;</div> <div>（4）吸取勻漿液到離心管，4℃5000&times;g 離心5-10min，取上清，-20℃或-80℃保存，避免反復(fù)凍融。&nbsp;</div> <div>&nbsp;</div> <div>6、 尿液、唾液等其他液體生物樣本&nbsp;</div> <div>&nbsp;</div> <div>1000&times;g離心20min，取上清即可檢測。&nbsp;</div> <div>&nbsp;</div> <div>總的來說，因為ELISA只能檢測可溶性蛋白的含量，所以應(yīng)保證所有樣本均為澄清的液體，沉淀或懸浮物都應(yīng)離心去除。為了保證檢測的準確性，保存于-20℃或-80℃的樣本最好在1-6個月內(nèi)檢測；4℃保存的樣本應(yīng)在1周內(nèi)進行檢測。另外，還應(yīng)保證樣本不含NaN3，因為NaN3會抑制HRP的活性，從而導(dǎo)致假陰性的結(jié)果。&nbsp;</div> <div>&nbsp;</div> <div>&nbsp;</div> <div>公司憑著經(jīng)營<strong>ELISA試劑盒</strong>系列多年經(jīng)驗，熟悉并了解試劑盒系列市場行情，具有良好的市場信譽，專業(yè)的銷售和技術(shù)服務(wù)團隊，迎得了國內(nèi)外廠商的認可，歡迎來涵洽談交流！</div> <div>&nbsp;</div>