細胞培養出現問題了應該怎么辦

細胞無法在培養器皿上貼壁生長<o:p></o:p> 1. 細胞胰酶消化過度：縮短胰酶消化時刻或削減胰酶用量。<o:p></o:p> 2. 支原體污染：阻隔細胞，查看是不是傳染支原體；清潔通風廚和培育箱，如細胞被污染，滅菌處理后丟掉。<o:p></o:p> 3. 培育基中無附著因子：如果運用的是無血清配方，應保證富含附著因子或許運用經過包被的培育板。<o:p></o:p> 一、細胞成長緩慢<o:p></o:p> 1. 培育基或血清改變，比較不同培育基配方中葡萄糖、氨基酸及其他成分有無區別；經過成長試驗對比新老批次血清有無區別；增大細胞初始接種密度；使細胞逐漸習慣新的培育基。<o:p></o:p> 2. 必需成長推進成分（如L-谷氨酰胺或成長因子）耗竭、缺乏或分解：去掉原培育基，參加新鮮培育基；向培育基中增加成長推進成分（如L-谷氨酰胺）。<o:p></o:p> 3. 輕度細菌或真菌污染：在不增加抗生素的條件下進行培育，如細胞被污染，滅菌處理后丟掉。<o:p></o:p> 4. 時刻存儲不妥：血清應于-5℃至-20℃下貯存；培育基應于2℃~8℃下避光貯存；盡量削減血清和培育基見光時刻。<o:p></o:p> 5. 細胞初始接種密度低：增大活細胞接種密度。<o:p></o:p> 6. 細胞變老、老化：將老化細胞丟掉，取用代數較少的細胞。<o:p></o:p> 7. 支原體污染：阻隔細胞，查看是不是傳染支原體；清潔通風廚和培育箱，如細胞被污染，滅菌處理后丟掉。<o:p></o:p> 二、培育基pH值改變敏捷<o:p></o:p> 1. 培育箱CO2分壓設置過錯：依據培育基中NaHCO3的濃度增大或下降培育箱CO2的分壓，NaHCO3濃度為2.0-3.7g/L時，應相應地運用5%-10%的CO2分壓。<o:p></o:p> 2. 細胞培育瓶瓶蓋過緊：將瓶蓋旋松1/4圈。<o:p></o:p> 3. 碳酸氫鹽緩存體系緩沖才能缺乏：參加HEPES緩沖液，使其終濃度為10-25mM。<o:p></o:p> 4. 培育基中鹽含量不正確：CO2平衡環境中運用以Earle平衡鹽為根底的培育基，大氣條件下運用以Hanks平衡鹽為根底的培育基。<o:p></o:p> 5. 細菌、酵母或真菌污染：將細胞和培育基滅菌處理后丟掉。<o:p></o:p> 三、細胞凋亡<o:p></o:p> 1. 培育箱中無CO2：監測培育箱中CO2運用速度以便斷定及時更換氣瓶；常常查看管路銜接處是不是漏氣；不要頻頻敞開培育箱門。<o:p></o:p> 2. 培育箱內溫度有動搖：監測培育箱內溫度，及時校對。<o:p></o:p> 3. 運用抗生素到達毒性濃度：削減抗生素的用量；運用無血清培育基時，抗生素濃度應下降至1/10。<o:p></o:p> 4. 細胞復蘇或凍存時遭到損害：取用新的細胞。<o:p></o:p> 5. 培育基的滲透壓不合適：查看徹底培育基的滲透壓。大多數哺乳動物細胞可耐受260~350mOsm/kg的滲透壓，參加某些試劑和藥物后會影響培育基的滲透壓；昆蟲細胞培育基的滲透壓（340~380mOsm/kg）要高于哺乳動物細胞。<o:p></o:p> 6. 培育基中毒性代謝商品積蓄：去掉原培育基，換用新鮮培育基。<o:p></o:p> 四、懸浮細胞集成團<o:p></o:p> 1. 存在鈣離子和鎂離子：用不含鈣離子和鎂離子的平衡鹽溶液清潔細胞，輕輕吹打細胞，使其構成單細胞懸液。<o:p></o:p> 2. 支原體污染：阻隔細胞，查看是不是傳染支原體；清潔通風廚和培育箱，如細胞被污染，滅菌處理后丟掉。<o:p></o:p> 3. 蛋白水解酶消化過度導致細胞裂解、DNA開釋：用0.001%DNA酶I處理細胞；用PBS沖刷后再接種到新培育基中。<o:p></o:p> 本司產品火熱促銷中，主營產品有elisa試劑盒、血清、細胞株、規范品、染色液、培育基、抗體等，我司與各大高校醫院均有協作。產品報價優惠，質量保證，產品買的多折扣就多，另有禮物贈送，歡迎來電訂貨！本公司產品僅用于科研使用，不供臨床實驗<o:p></o:p>

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